■研究法	★マイクロダイアリシスによるグルタメートの測定
	溶液 -設置 ダイアリシス -分析 -EPC 保守	←→マイクロダイアリシス法-HPLC法

　 In vivoマイクロダイアリシスによる皮下グルタメートの測定

グルタメート分析の原理 微量生体試料分析システム　HTEC-500↓は、 グルタミン酸オキシダーゼ（E.C.1.4.3.11）を固定化したリアクターと、 高速液体クロマトグラフィー（High-performance Liquid Chromatography：HPLC） -電気化学検出器（Electrochemical detector：ECD） を組み合わせて測定する。 分離カラムGU-GEL↓で夾雑物と分離されたGluは、リアクター（固定化酵素カラム E-ENZYMEPAK）↓によって、2-ketoglutalateと過酸化水素に変換する。 Glu Oxidase Glu + O2 + H2O →→→→→→ H2O2 + 2-ketoglutalate 電気化学検出器 ECDの白金電極↓で、この過酸化水素を検出する。 H2O2→→→→→→ H2O2 + 2H+ + 2e-（+ 450mV vs. Ag/AgCl） ECDセル内は、作用電極（＝白金電極）、対極電極、参照電極の3種類の電極で構成されている。 電気化学的に活性な物質は、カラムで分離された後、作用電極上を通過して、その濃度に比例した電流を生じる。 電解により発生した電流は、0.1nA当たり1mVの電圧に変換される。




• 参考
  • eicom
  • エイコム情報 No. 28
  →分析全般に関わる注意事項
  
  
• 設備

  微量生体試料分析システム　HTEC-500	設置-分析-保守	→[Eicom]
  マイクロシリンジポンプ　ESP-32型	ダイアリシス	→[Eicom]
  オートサンプリングインジェクタ M-504	分析	→[Eicom]
  データプロセッサ EPC-500型 Power Chrom	EPC	→[Eicom]

  
  
• 消耗品

  設 置 ／ 分 析	白金電極 WE-PT/ガスケット GS-25P	説明-設置-保守	（アセトン）
  	プレカラム	設置-保守	→[Eicom]
  	グルタメート分離カラム EICOMPAK GU-GEL	設置-保守	→[Eicom]
  	グルタメート用酵素カラム EICOM E-EN2	設置-保守	→[Eicom]
  	（参照電極）	（メタノール） （パラフィルム/キムワイプ） （ダイヤモンドコンパウンド） （洗瓶）
  	（ドレイン内の空気抜き用ディスポシリンジ）
  	（ポンプ裏の洗浄用ディスポシリンジ）
  	（標準液注入用シリンジ）
  ダ イ ア リ シ ス	皮膚用プローブ
  	延長チューブ/バイトンチューブ	（キッチンハイター）
  	ガスタイトシリンジ
  	サンプルバイアル SV-08
  	サンプルバイアル用キャップ SVC-08

  
  
• 溶液作成用消耗品

  移動相 標準液 リンゲル アセトン メタノール

  移動相用ガラス瓶 ガラスメスシリンダー ガラスビーカー スパチュラー ピペットマン

  薬包紙 パラフィルム キムワイプ 洗瓶

  
  
  

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グルタメート用作用電極　白金電極 WE-PT＝過酸化水素作成電極 　→設置-保守 アセチルコリン、グルタメート、ラクテート測定用電極 グルタメートは酵素反応により過酸化水素を発生させて検出する。↑ 直径3mmの白金を特殊製法により、円盤に埋め込まれているので、ノイズの小さい電極となっている。 有機溶媒含有溶液は絶対に白金電極付き電解セルを通さないように注意！

移動相用瓶---栓付きPILEX等1L透明ガラス瓶　←→移動相の調整 安いガラスは、金属イオンが出てくることがある。 金属イオンが出てくると、クロマト強度が移動して、リテンションタイムがずれることがあるので、「栓付きPILEX等1L透明ガラス瓶」などを利用することが推奨される。 移動相に加えるEDTAも、金属イオンの流出を抑えるため。





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