★グルタメートの測定

ダイアリシス

マイクロシリンジポンプ　ESP-32型 ガスタイトシリンジ	→[Eicom]
臓器用透析プローブ OP-
延長チューブ



• ダイアリゼートの採取
  • 透析プローブを刺入し、マイクロシリンジポンプでリンゲルを2μl/min潅流する。
  • プローブ挿入前に、プローブにリンゲルを通しておいた方がスムーズに刺入できるかもしれない。
  
  
• ダイアリゼートの保存
  • 翌日分析するときは、冷蔵保存（４℃）。
  • リンゲル液のままでは壊れやすいので、サンプル：移動相＝１：１で混ぜて 保存するのが望ましい。
  • 冷蔵保存のサンプルは持ちが悪いので、分析まで何日もかかる場合は冷凍保存（-20℃）。さらに長く保存する場合は、可能なら-80℃で冷凍保存が望ましい。
  • ダイアリゼートをそのまま冷凍させ、分析直前に解凍。

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☆エイコム　高精度超微量定量ポンプ　インフュージョンポンプ（マイクロシリンジポンプ　）ESP-32型

• マイクロダイアリシスのサンプリングにおいて、潅流液の流速の安定性、精度は実験の左右にきわめて重要！
• ESP-32型は、マイクロダイアリシス、マイクロインジェクションなどの実験系において、1分間に1μl（μl/min）オーダーの送液を精密に行うことを目的とした高性能のシリンジポンプ。
• 送液のシリンジは、ハミルトン社製のガスタイトシリンジ（10μl〜5ml）を用いる。
  2.5mlのシリンジを用いたときの可能な流速範囲：0.001〜99.99 μl/min
  
  

  flow rate	syringe size	stop time
  2.00	250	000

• OP-50-05型のプローブ（約5μL）と50cmの延長チューブ（約5μL）を付けた場合、2μL/minで灌流した場合回収まで約5分かかる。

☆皮膚用透析プローブ OP-50-05 (23G)

• 標準の臓器用透析プローブ OP-50-05は、動物の臓器用透析プローブであり、肝臓、心筋、胃壁、皮膚などから目的とする物質をサンプリングするためのプローブ。
• 皮膚用には、皮膚を貫通しやすいように、標準よりも太い23G針を先端につけたもらった。（通常はG）
  
  
• OP-50-05型：膜長 5mm、導管長50mm

  金属ー針	ポリエチレンチューブ	透析膜	ポリエチレンチューブ	金属ー鈍
  金属ー針：皮膚に差し込めるように、23G針を先端につけたもらった。 導管材質：ポリエチレンチューブ（PE-10） 外径φ：0.61mm、 内径φ：0.28mm 透析膜: 再生セルローズ　外径φ：0.22mm、 内径φ：0.20mm 金属ー鈍:（延長チューブを介して）マイクロシリンジポンプと繋ぐように、90度にカットされている。 膜前後に補強のためフューズシリカという管が入っている。内径φ0.10mm OP-50-05型の容量は、約5μL。 cut-off 値は、50 kDa 回収率：膜長 3mm，灌流速度2μL/min，37℃設定で in vitroで求めた回収率は、約18%（膜長 5mm ---　18% × 5/3 = 30%）
  プローブチェック 出荷時には、通液テスト、漏れテストが行われている。空気で漏れテストが行われているが、液は通されていないので、潅流液を流す前に、蒸留水を流して、漏れがないことをチェックしたほうがよい。 2.5mlまたは1mlのディスポシリンジで蒸留水を入り口（90度カット側）から流す。比較的強く伸しても大丈夫。 もし流れない場合は、透析部を蒸留水に浸けて、再度入り口から蒸留水を押し流す。 蒸留水の流れるのを確認した後、潅流液を入り口から流す。
  プローブの洗浄 ディスポ使用が望ましいらしい。 再度使用している施設もあるようだ。MilliQ水を流す（1H）。（酵素反応がない場合は、0.3% H2O2で洗浄する。） 再度使用するときは、MilliQ水→50%EtOH in MQ→MilliQ水

• 乾燥した状態で塩を含んだ潅流液を流すと詰まるおそれがある。
  ---プローブ挿入前に、プローブにリンゲルを通しておいた方がスムーズに刺入できるかもしれない。
• 人工髄液は、リン酸カルシウムの細かい結晶ができやすいため細心の注意が必要。

☆延長チューブューブ

ジョイント付きテフロンチューブ	JT-10	0.1 X 0.4 X 50cm 内径φ0.125mm 50cmで約5μL
ジョイントバイトンチューブ	JB-30	QTY. 1mm


終了後の清掃
• 動物に入る前の延長チューブは使用後、MilliQ水で洗浄。
• 動物に通過した後の延長チューブは使用後、キッチンハイター（約100倍希釈）で洗浄する。ペンチで鈍にした注射針をつけたツベルグリン用ディスポシリンジで、キッチンハイターを注入し、15分ぐらい放置した後、MilliQ水でしっかり洗浄する。MilliQ水での洗浄は、マイクロシリンジポンプを使うと便利。（しかし、シリンジポンプをストップさせる設定をしてないと、ガスタイトシリンジを破損してしまうので、要注意！）
• 長く使用しない場合は100%メタノールで洗浄後、乾かした状態で保存する。
• バイトンチューブは汚れがつきやすいので、頻繁に交換する。

☆ガスタイトシリンジ

• HAMILTON GASTIGHT SYRINGES 81417
• 伊藤製作所のガスタイトシリンジ

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