★グルタメートの測定

メンテナンス

→HTEC-500ー送液系の保守 →電気化学検出器ー白金電極の保守 →グルタメート分離カラムの保守 →プレカラムの保守 →グルタメート用酵素カラムの保守 →分析全般に関わる注意事項 →溶液がクロマトに及ぼす影響

☆HTEC-500ー送液系（送液ポンプ）

• 送液系の洗浄は、いずれの場合も、電極の劣化を防ぐため、ECDセル部には洗浄液を流さないように、ECDセルへの接続をはずして操作する。
  
• 他の分析に使用していた送液ポンプをGlu系に変換する時
  MilliQ水で前の移動相の塩類が残らないように良く洗浄した後、移動相で置換する。特にEDTAのような価数の大きいものは分離カラム GU-GELに強く保持され、突然ベースライン変動を起こすので注意する。

  MilliQ水で洗浄
  ↓
  移動相で流路系を置換	少なくとも3〜4時間（400μl/min）

  
  
• 逆にGlu測定計からカテコールアミンやアセチルコリンの測定計に戻す時
  Glu分析用のイオンペアー剤が残らないように留意する。

  MilliQ水で洗浄	3時間（400μl/min）
  ↓
  メタノールで流路を洗浄	3時間（400μl/min）
  ↓
  MilliQ水で洗浄	3時間（400μl/min）

  
  
• しばらく装置を使用しない場合

  20%メタノール溶液を流す。 カラムを外しているので、カラムの手前のチューブから廃液を取る。 1時間くらい流した後、2方ジョイント（カラムのダミー）をつなぎ、セルまでのラインにも20%メタノールを流しておく。

☆電気化学検出器ー白金電極 WE-PTの保守　←→説明/設置

　[電極の保存]

• すべての作用電極の保存は、乾燥状態で保存しても問題がない。

　[電極の交換・洗浄]

• 検出感度の低下は、作用電極の汚れに起因する場合が多い。
• 汚れの原因は、白金表面に形成された酸化皮膜、あるいは白金表面に堆積した有機物であると考えられる。
• 通常の清掃：から拭きはしてはいけない！
• 有機物による汚れ：設置時と同様に清掃
  有機物による汚れはアセトンで濡らしたキムワイプで拭くときれいに除去できる。
  アセトンを使うときは、エグザミグローブ使用！手ががさがさになる。
  
• 酸化被膜を除去する場合は、綿棒（あるいはキムワイプ）にダイヤモンドコンパウンド（#14.000）を少量取り、綿棒が黒くなる程度まで白金表面を磨く。ダイアモンドコンパウンドがない場合は、研磨剤入りの歯磨き粉で代用する。
• 白金表面が黄変した場合も、ダイアモンドコンパウンドで除去する。
  白金の黄変は場合によって、Gluの検出感度を上げるときがある。又、ピークのテーリングの原因になる場合がある。黄変の明らかな原因は不明であるが、リン酸イオン、金属イオンがその成因の一つであると考えられる。

☆プレカラムの保守　←→設置

• 分離カラムの劣化を防ぐために、プレカラム（ガードカラム）を浸ける。
• 装置を毎日稼働した場合、約1〜2ヶ月程度でプレカラムを交換する。充填剤の補充、および上流側の金属フィルターを交換を依頼する。
• プレカラムの交換頻度は移動相および試料の清浄度に依存する。
• 長期間放置したときも、充填する。プレカラム充填剤は、必ずCH-GELを使用する。

☆グルタメート分離カラム GU-GELの保守　←→設置

• 終了時：HPLCから取り外し、中身は移動相のまましっかり栓をして、室温で保存する。
• 分離カラムの再生は非常に困難なので注意！
  • 充填剤は温度差による膨潤収縮に非常に弱いため、絶対冷蔵庫には入れない。
  • 有機溶媒でのカラム洗浄も充填剤の膨潤収縮を伴うので、避ける。
  • 強酸、強アルカリの使用も控える。
• ピーク形状の悪さ、圧力の上昇などはカラムが原因の場合だけではない。電極の汚れ、プレカラム、配管のつまりなどが原因の場合もあるので、よく調べてからエイコムに相談する。

☆固定化酵素リアクター ＝ グルタメート用酵素カラム EICOM E-EN2の保守　←→設置

• 終了時：HPLCから取り外し、中身は移動相のまま、始めに入っていた容器に入れて保存。冷蔵庫で保存！
• リアクターの寿命は移動相をどれだけ流したかによって決まる。
• ベースラインの安定を待つときはリアクターははずしておく。
• リアクターなしで安定がとれた後、リアクターを取り付ける。
• 酵素の安定pHは5.5〜7.5の範囲。ここから離れた範囲では失活を早めるので、移動相の調整には十分注意する。
• 有機溶剤にも弱いので、注意！
• リアクターは移動相に浸けて密閉して、冷蔵（4℃）保管する。（凍結してもいけない！）

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