☆0.1 M phosphate buffer (pH 7.4): 0.1M PB
リン酸２水素ナトリウム・２水
（リン酸１ナト）1)
NaH2PO4･2H20 | 4.5 g | 6.0 g |
リン酸水素カリウム
（リン酸１カリ）
K4HPO4 | 21.0 g | 28.0 g |
| 蒸留水 | | |
| Total | 1.5 l | 2 l |
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☆0.1M phosphate buffer (pH 7.39): 0.1 M PB
リン酸２水素ナトリウム・２水
（リン酸１ナト）1)
NaH2PO4･2H20 | 3.31 g | 6.62 g | 16.55 g |
リン酸水素２ナトリウム・12 水
（リン酸２ナト）2)
NaHPO4･12H20 | 33.7 g | 67.4 g | 168.5 g |
| 蒸留水 | →1 l | →2 l | →5 l |
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1)リン酸１ナトは容易に溶ける。 2)リン酸２ナトは難溶。
| 【作り方】 |
- 三角フラスコなどに、Totalの8-9割方の蒸留水を入れ、リン酸１ナトを入れ、ホッティングスターラー撹拌する。
- 溶けた後に、リン酸１カリ or リン酸１ナトを加えて、撹拌する。
- 完全に溶けた後、蒸留水を加えて全量で2000ml にメスアップする。
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☆0.1 M Phosphate Buffer Saline: 0.1M PBS
| 0.1M PB | 1 l | 3 l | 5 l |
| NaCl | 9.0 g | 27.0 g | 45.0 g |
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☆0.01 M Phosphate Buffer Saline : 0.01M PBS
| 0.1M PB | 100 ml | 300 ml | 500 ml |
| 蒸留水 | 900 ml | 2700 ml | 4500 ml |
| NaCl | 9.0 g | 27.0 g | 45.0 g |
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☆Solution for wash: PBST
| 0.5% | Triton X-100 |
| | 0.01M PBS |
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☆Solution for diluting antibody
| 0.9 % | NaCl | 3.6 g |
| 0.25 % | Lamda-Carragenan | 1 g |
| 0.5 % | Triton X-100 | 2 g |
| 0.05 % | NaN3(アジ化ナトリウム) | 0.2 g |
| 5 % | Normal serum(Goat) | 100 cc |
| 蒸留水 | →400 ml |
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☆0.05 M Tris-HCl Buffere : 0.05 M TB
| Tris | 3.03 g | 6.06 g |
| 2H- HCL | 10 ml | 20 ml |
| 蒸留水 | →500 ml | →1 l |
Tris：hydroxymetyhl) aminomethane
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☆0.05 M Tris-HCl Buffere : 0.05 M TB
| 0.2M Tris 水溶液 | 250 ml |
| 0.2M 塩酸 | 192 ml |
| 蒸留水 | 558 ml | |
pH を測定して
A液（アルカリ側）あるいは
AＢ液（酸性側）にて調整する。
すべて４℃で保存する。 |
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☆0.05 M Na-cetate Buffer (pH 4.3)
| CH3COONa・3H2O | 6.805 g |
| 蒸留水 | 1 l |
| 氷酢酸 | →pH 4.3 |
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☆10 % Formalin
局方fromalin は約39 % である。10 % fromalinの実際の濃度は実際は約 4 %に相当する。
- 免疫組織化学など以外は、10 % fromalinで灌流固定、後固定する。
- 金属電極でマーキングした場合は、fromalinの前に、10 % potassium fesocyanideで灌流する。
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☆Stock -Solution
8% paraformaldehyde (PF) in DW ↓
| PF | 80 g |
| 蒸留水 | 900 ml |
| 2N NaOH | ー |
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【作り方】
- 三角フラスコなどに、パラホルムアルデヒドと蒸留水を加えるを入れる。
フラスコの口は、パラフィルムとアルミホイルなどでしっかり閉める！
- ホッティングスターラーで、沸騰させない程度に加温しながら、撹拌して溶かす。
- ほぼ溶けたら、スタラーで撹拌しながら、液が透明になるまで、少しずつ2N NaOHを滴下する。
- さました後、濾過して蒸留水を加えて1000 ml にメスアップする。
- 冷蔵庫に保存
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☆4％ PF in 0.1 M PB
| 4 % | 8% PF | 100 ml |
| | 0.2 M PB | 100 ml |
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☆1% paraformaldehyde (PF)+
1.25％glutaraldehyde (GA)の混合液
| 1 % | 8% PF | 25.0 ml |
| 1.25 % | 25% GA | 10 ml |
| | 0.2 M PB | 100 ml |
| | 蒸留水 | 65.0 ml |
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☆Stock -Solution 飽和ピクリン酸 →
| picric acid | 2.1 g |
| 蒸留水 | 150 ml |
- 三角フラスコに、picric acidと蒸留水を入れる。
フラスコの口は、パラフィルムとアルミホイルなどでしっかり閉じる！
- ホッティングスターラーで、約60℃に加温して、撹拌しながら溶解させる（多少、沈渣が残って良い）。
- 褐色ビンに入れて、暗所にて室温で1〜2日間保存する。針状結晶が残っていれば飽和している。
- 使用時、上清を静かにとり、２重の濾紙で濾過する。
＊飽和ピクリン酸は急激に熱したり、衝撃を加えると爆発するので注意！
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☆Zamboni固定液
| 4 %(2%) | 8% PF | 1.5 l | 2.5 l |
| 0.21 % | 飽和picric acid | 150 ml | 300 ml |
| 0.05 % | GA | 6 ml | 12 ml |
| | 蒸留水 or 0.1MPB | →3 l | →6 l |
☆ブアン液
| 飽和picric acid | 15 ml |
| ホルマリン | 6 ml |
| 氷酢酸 | 1 ml |
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☆Frozen sectionの作成前 →
| 25 % | sucrose |
| （0.05 % | アジカナトリウム） |
| | 0.1M PB |
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