マウスtail(Lac-Z)のX-gal染色

平成　年　月　日　　 イニシャル　

サンプル 総数　　　

  1. 0.4-0.6 cm位の尾を3?4等分し1.5mlのエッペンドルフチューブへ

  2. その中にPBSをそれぞれ500μl加えて（tailが浸ればよい）、5分@RT。

  3. なじんだらアスピレータなどでPBSを捨て、固定液を500μl加える。

  4. 300mlの水をビーカーに入れ、電子レンジで30秒温め、取り除く。

  5. tailを固定液に入れたまま、チューブの蓋は閉めないでその電子レンジで7?10秒温める。

  6. PBSで洗浄、5分×3回。

  7. PBSを捨て、染色液をそれぞれ500μlずつ加える。

  8. 37℃の恒温器で1?3hours、もしくはOver night。

    9. 　　　　　　　　　　月　日　　時　分　?　　月　日　　時　分

  9. それぞれPBSで1回洗い、10％中性フォルマリンを500μlずつ加える。

    10. 　　　　　　　　　　　　⇒　save @ 4℃

  10. 実体顕微鏡にて判定。

※固定液（2.5％グルタールアルデヒド in SpM buffer） ・用事調製

　　final stock

2.5％グルタル　　 25％　　　10ml 1ml

1x PBS 10x 10ml 1ml

2mM CaCl2 1M 0.2ml 20μl

2mM MgCl2 1M 0.2ml 20μl

0.3% グルコース Powder 0.3g 30mg

0.3%フルクトース Powder 0.3g 30mg

100ml 10ml

　　final stock

5mM フェリシアン化カリウム　　100mM 5ml 0.5ml

5mM フェロシアン化カリウム　　 100mM 5ml 0.5ml

1mg/ml X-gal 50mg/ml 2ml 0.2ml

0.1M HEPES(pH7.4) 1M 10ml 1ml

1x PBS 10x 10ml 1ml

2mM CaCl2 1M 0.2ml 20μl

2mM MgCl2 1M 0.2ml 20μl

0.3% グルコース Powder 0.3g 30mg

0.3%フルクトース Powder 0.3g 30mg

100ml 10ml